F.1 回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口微生物透過(guò)率

　　F.1.1 儀器設備和材料應符合以下要求：

　　1 儀器設備：

　　Φ90玻璃平皿(或塑料平皿);

　　空氣微生物采樣器(固體撞擊式采樣器、離心式采樣器、液體沖擊式采樣器等均可使用，常用的為安德遜(Andersen)采樣器，隸屬于固體撞擊式采樣器);

　　微生物氣溶膠發(fā)生器(由氣泵、油水分離器、流量計、高效過(guò)濾器、噴霧器、緩沖瓶等組成);

　　各種玻璃移液管、吸管、試管、容器瓶等;

　　計時(shí)器(如秒表);

　　恒溫培養箱;

　　潔凈工作臺;

　　高壓蒸汽消毒鍋。

　　2 材料：

　　胰蛋白酶大豆瓊脂培養基;

　　生理鹽水;

　　75%酒精;

　　菌種(宜選用毒性小或沒(méi)有毒性，且便于區別大氣雜菌的特定菌種，常用的有枯草芽孢桿菌、黏質(zhì)沙雷氏菌、大腸噬菌體等);

　　采樣介質(zhì)可選用硅酮類(lèi)、石油胨類(lèi)、醇類(lèi)、糖類(lèi)、纖維素類(lèi)、蛋白類(lèi)、混合類(lèi)、組織培養液等;

　　套筒(測定回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口時(shí)需要使用，罩住整個(gè)入口，使檢漏范圍包括邊框，長(cháng)度應使通過(guò)氣流時(shí)間為0.5s～1s，見(jiàn)圖F.1.1)。

　　F.1.2 透過(guò)率應按以下方法評價(jià)：

　　在回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口進(jìn)風(fēng)端加設套筒，在套筒口部發(fā)生微生物氣溶膠，在過(guò)濾器出風(fēng)面用浮游菌法采樣，由回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口前后的微生物氣溶膠濃度可計算得出微生物透過(guò)率。

　　F.1.3 檢測步驟應符合下列要求：

　　1 制定方案：明確評價(jià)任務(wù)，制定詳細的評價(jià)方案，包括確定微生物氣溶膠、發(fā)生器所需的菌液濃度、潔凈壓縮空氣流量，確定在回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口出風(fēng)端的微生物采樣周期、采樣次數等，一般可根據回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口的塵埃顆粒物過(guò)濾效率進(jìn)行計算。

　　2 實(shí)驗準備：根據預先制定的評價(jià)方案，準備所需材料、儀器設備，制作采樣培養皿，一般而言，采樣細菌用營(yíng)養瓊脂培養基，采集真菌用沙氏或真菌選擇培養基，采樣病毒用根據病毒特性配制的采樣介質(zhì)。

　　3 發(fā)生微生物氣溶膠：將培育好的高濃度微生物溶液，一般為(108～1010)cfu/mL，利用生理鹽水按10倍稀釋法逐次稀釋至需要的低濃度(步驟1確定的濃度)，然后由移液管、吸管量取一定容積的低濃度微生物溶液至氣溶膠發(fā)生裝置的溶液瓶，由微生物氣溶膠發(fā)生器在回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口的進(jìn)風(fēng)端將微生物溶液霧化發(fā)生微生物氣溶膠。

　　4 采樣：對于回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口，可在其后的出風(fēng)管道中采樣，離排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)門(mén)的距離根據實(shí)際工程而定，原則上出風(fēng)后有所混合，能近則好，采樣點(diǎn)沿風(fēng)管寬度方向均勻布置3點(diǎn)。采樣周期、采樣次數按預先制定的評價(jià)方案執行。采樣過(guò)程中，不能中斷微生物氣溶膠的發(fā)生，采樣結束后才能停止發(fā)生微生物氣溶膠，此后噴霧器中必須尚存不少于一半的微生物溶液，且需對剩余菌液活性進(jìn)行涂布法驗證，以修正菌液濃度。

　　5 培養：將采好的平皿立即蓋上蓋，細菌類(lèi)在(35～37)℃培養(1～2)d，結核菌培養3周，真菌在28℃培養3d。上述培養時(shí)間可根據所采樣微生物特性而適當調整，培養的過(guò)程中應定期觀(guān)察培養箱內菌落的生長(cháng)情況，避免培養箱內干燥菌落不生長(cháng)或培養皿內菌落過(guò)多充分生長(cháng)匯合等情況的發(fā)生。

　　6 計數：可以目測、電子顯微鏡、菌落計數器等對采集到且培養好的菌落進(jìn)行計數，當采到的菌落很多時(shí)，在它們未生長(cháng)匯合前，用顯微鏡及早觀(guān)察，將平皿劃成許多相等的部分抽出一部分數菌，然后乘以所劃份數，即可得出每皿總菌數。計數完畢后，可根據式(F.1.3—1)計算濃度：

　　8 消毒滅菌：實(shí)驗結束后，需對剩余菌液以及所用各種儀器、設備、平皿等進(jìn)行消毒滅菌、酒精擦洗處理。

　　F.1.4 在進(jìn)行潔凈室生物學(xué)評價(jià)時(shí)應符合以下要求：

　　1 正式試驗前，應進(jìn)行預備試驗，并對各種儀器進(jìn)行調試和標定。

　　2 應進(jìn)行陽(yáng)性對照試驗。

　　3 應進(jìn)行陰性對照試驗。

　　4 應在陽(yáng)性試驗中長(cháng)菌，陰性試驗組不長(cháng)菌。

　　5 實(shí)驗過(guò)程中應注意實(shí)驗人員的安全防護，實(shí)驗結束后應做好各種儀器、設備、衣物等的消毒滅菌處理。

　　6 試驗結束后，需對微生物氣溶膠發(fā)生器內的剩余菌液活性進(jìn)行涂布法驗證，修正式(F.1.3—3)中的菌液濃度。

　　7 采樣周期應設計合理，當確定采樣周期存在一定困難時(shí)，宜增加采樣次數，每次采樣使用不同的采樣周期。

　　F.2 對微生物氣溶膠局部泄漏擴散的抑制能力評價(jià)

　　F.2.1 儀器設備和材料應符合下列要求：除不需要套筒，但需要Φ90培養皿分層布置框架(圖F.2.1所示)外，其他設備和材料與第F.1.1條相同。

　　F.2.2 漏泄擴散抑制能力可按以下方法評價(jià)：在潔凈室內的要求地點(diǎn)(可任意選定或選擇有代表性的地點(diǎn))，用微生物氣溶膠發(fā)生器人工發(fā)菌，進(jìn)行潔凈室對微生物氣溶膠局部泄漏擴散的兩類(lèi)抑制能力的評價(jià)：

　　1 抑制微生物污染擴散有效高度及有效區域的評價(jià)：利用沉降菌法，將Φ90培養皿按不同垂直高度在室內分層均勻布置(如分3層0.8m、1.2m、1.5m，每層對角線(xiàn)5點(diǎn)布置)。

　　2 自?xún)魰r(shí)間的評價(jià)：利用浮游菌法進(jìn)行評價(jià)，每隔一段時(shí)間用空氣微生物采樣器進(jìn)行采樣，采樣地點(diǎn)宜選擇有代表性的固定區域(如在1.5m左右的呼吸帶區域)，觀(guān)察潔凈室內微生物污染濃度隨時(shí)間的變化規律，從而對潔凈室抑制微生物氣溶膠局部泄漏擴散的能力作出評價(jià)。

　　F.2.3 泄漏擴散抑制能力可按以下步驟評價(jià)：

　　1 制定方案：明確評價(jià)任務(wù)，制定詳細的評價(jià)方案，包括確定微生物氣溶膠發(fā)生器所需的菌液濃度、潔凈壓縮空氣流量、氣溶膠發(fā)生時(shí)間周期(即確定模擬的微生物氣溶膠泄漏擴散是瞬時(shí)發(fā)生還是持續發(fā)生，發(fā)生周期為多長(cháng))，確定采樣地點(diǎn)、采樣時(shí)間間隔、每次采樣的采樣周期、采樣次數等。

　　2 實(shí)驗準備應符合第F.1.3條的要求。

　　3 發(fā)生微生物氣溶膠：將培育好的高濃度微生物溶液，利用生理鹽水按10倍稀釋法逐次稀釋至需要的低濃度，然后由吸管量取一定容積的低濃度微生物溶液至氣溶膠發(fā)生裝置的溶液瓶，由微生物氣溶膠發(fā)生器在潔凈室內的要求地點(diǎn)將微生物溶液霧化發(fā)生微生物氣溶膠。氣溶膠發(fā)生時(shí)間周期按預先制定的評價(jià)方案執行。

　　4 采樣：在潔凈室內的要求地點(diǎn)用空氣微生物采樣器進(jìn)行浮游菌法采樣或用Φ90培養皿進(jìn)行沉降菌法采樣，采樣地點(diǎn)、采樣時(shí)間間隔、采樣周期、采樣次數按預先制定的評價(jià)方案執行。

　　5 培養應符合第F.1.3條的要求。

　　6 計數應符合第F.1.3條的要求。

　　7 對微生物氣溶膠局部泄漏擴散的抑制能力評價(jià)：

　　1)沉降菌法：由步驟6得出的每層高度下的每個(gè)采樣點(diǎn)的室內微生物氣溶膠濃度可對抑制微生物污染擴散有效高度及有效區域作出評價(jià);

　　2)浮游菌法;由步驟6得出的每個(gè)采樣時(shí)刻的潔凈室內微生物氣溶膠濃度可作出一條曲線(xiàn)，直觀(guān)地反映出潔凈室內微生物氣溶膠濃度隨時(shí)間的變化規律，求出自?xún)魰r(shí)間。

　　8 消毒滅菌應符合第F.1.3條的要求。

　　F.2.4 評價(jià)應符合第F.1.4條的要求。

　　F.3 生物安全柜的隔離系數

　　F.3.1 儀器設備和材料除不需要套筒外，應符合第F.1.2條的規定。另按現行行業(yè)標準《生物安全柜》JG 170需1根聲Φ70、長(cháng)為安全柜凈深加150mm的塑料圓筒。

　　F.3.2 檢測隔離系數應按現行行業(yè)標準《生物安全柜》JG 170第6.3.4條的方法檢驗。

　　F.3.3 安全柜隔離系數λ按下式評價(jià)：